分子生物学检验（血液病融合基因检测）
分子生物学检验（血液病融合基因检测）
一、标本采集
抽取新鲜血液或骨髓液3-5毫升，EDTA抗凝（或者置于EDTA抗凝管中，颠倒混匀），迅速置于-20度冰箱冷冻保存（或者干冰盒中保存），12小时内送检。
常见细胞染色体及融合基因的异常表达
t（9，22）——BCR-ABL，常见于CML*及前B-ALL；
t（1，19）——PBX-E2α，常见于前B-ALL
t（15，17）——PML-RARα，常见于AML-M3*
t（4，11）——MLL-AF4，常见于前B-ALL
t（9，11) ——HRX-AF9，常见于AML-M4、M5；ALL
t（6，9）——DEK-CAN，常见于AML-M2
t（12，21）——TEL-AML1，常见于前B-ALL
t（3，5）——NPM-MLF1，常见于AML-M6
t（11，14）——TTG2-TCRα/δ，常见于T-ALL
t（10；14）——HOX-11-TCRα，常见于B-ALL
t（10，11）——CALM-AF10，常见于AML-M0、M4
t（11，19）——HRX-ENL，常见于AML-M4、M5；ALL
t（6，9）——DEK-CAN，常见于AML-M2
t（1，14）——TAL1-TCRδ，常见于T-ALL
t（8，21）——AML1-ETO，常见于AML-M2*；前B-ALL
inv（16）——CBFβ-MYHⅡ，常见于AML-M4EO*
t（3，5）——NPM-MLF1，常见于AML-M6
（带*者常提示预后较好）
二、临床意义
分子生物学检查对白血病诊断及分型有以下几方面意义。
1．补充MIC检查的不足 细胞遗传学是从染色体水平来检查的，而分子生物学检查是从基因、分子水平着手。有时染色体检查结果不能肯定，或不能发现基因异常，往往可以通过分子生物学检查予以明确。如t（9；22）的BCR-ABL融合基因，t（1；14）（p32；q11）的TAL-1-TCRδ融合基因，t（10；14）（q24；q11）的HOX-11-TCRα融合基因等。染色体检查可以阴性，用PCR法可以检测到有关的融合基因。
2．发现新的亚型 例如AML-M3有4种亚型，其中t（11；17）（q23；q11），t（11；17）（q13；q11）的MIC检查结果十分相似，无法区别，但所累及的融合基因，分别为PLZF-RARα及NUMA-RARα，只有依靠分子生物学方法检查才能鉴别。前者对维A酸治疗无反应，而后者在体外对ATRα敏感。
3．为研究白血病的发病机制打下基础 因为只有从基因水平进行研究，才有可能阐明白血病的发病机制。例如AML-M2融合基因，AML1-ETO基因可抑制共转录激活复合物（内含去乙酰化酶），可引起粒细胞分化障碍而造成白血病。抑制去乙酰化酶使组蛋白乙酰化，可使白血病细胞恢复分化而成熟。临床上应用G-CSF（促进分化）和苯乙酸（抑制去乙酰化酶）治疗已有成功的例子。
应用PCR、原位杂交等技术，可以在细胞水平研究某一基因的表达，如Bcl-2、P53、WT-1、多药耐药、肺耐药蛋白基因等。已证明，表达多药耐药基因，肺耐药蛋白Bcl-2、WT-1基因的急性白血病对化疗的疗效较差，缓解率较低，预后差。因此随着方法学的改进和简化，费用的降低，检测这些基因有可能被纳入白血病的分型，扩大MICM的分型，发展成为MICMG（形态、免疫、表型、细胞遗传学、分子生物学、特殊基因表达）分型，除诊断外，对白血病的预后，指导治疗将起重要作用。
三、注意事项
1、标本采集和运送过程中应严格注意避免溶血、凝血。
2、标本保存：存放于4～10℃冰盒中，可保留24小时，建议尽快送检。
